皂苷類活性成分積累分析！！！

    多生于蔭蔽濕潤的環(huán)境，可見其對光照溫 度有一定的要求，關(guān)于不同光照條件對珠子參皂苷 類次生代謝產(chǎn)物積累及同工酶表達(dá)筆者還未見研 究，因此用光照調(diào)控試驗，以揭示珠子參中不同同工 酶與次生代謝產(chǎn)物積累的相關(guān)性，掌握珠子參的生 長發(fā)育規(guī)律，探討不同光照對珠子參生長以及皂苷 類次生代謝產(chǎn)物積累的影響。MGC － 300H 人工氣候箱( 上海一恒科學(xué)有限公 司) ，Waters 2695 高效液相色譜儀，BIO － ＲAD 電泳 儀及 BIO － ＲAD mini 垂直電泳槽( 美國伯樂公司) ， GB204 型電子分析天平 ( 北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有 限公司) ; KQ － 200KED 超聲波清洗機(jī) ( 江蘇昆山超 聲波儀器有限公司) ; GZX － 9140MBE 電熱鼓風(fēng)干 燥箱 ( 上海博迅醫(yī)療設(shè)備有限公司) 。

    CAT 同工酶用 鐵染色法，SOD 同工酶用氮藍(lán)四唑法，POD 同工酶 用聯(lián)苯胺法。取 0. 1 g 根莖，液氮研磨，加入 10 mmol /L Tris － HCl PH 7. 4 緩沖液，料液比 1∶ 10，浸 提 24 h，10000 rpm 離心 10 min，取上清液，加入等量 40% 蔗糖溶液于 － 20℃ 冰箱保存?zhèn)溆茫捎镁郾? 酰胺凝膠垂直版電泳系統(tǒng)分析。SOD 和 POD 采用 濃度為 10% 分離膠，CAT 為 7. 5% 分離膠，濃縮膠均 為 3% 的分離度，Tris － Gly( PH 8. 3) 作為電泳緩沖 液，上樣量為 20 μl，電泳在冰上進(jìn)行，濃縮膠電流 15 mA，溴酚藍(lán)指示劑通過分離膠改為 20 mA，電泳 至含 40% 蔗糖溶液的溴酚藍(lán)指示劑遷移至距膠板 1 cm 時 停 止 電 泳。數(shù)據(jù)處理采用 Excel 2010，SPSS 19. 0 數(shù)據(jù)統(tǒng)計 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，用單因素方差分析( One － way ANOVA) 和最小顯著差異法( Least significant difference，LSD 法) 進(jìn)行數(shù)據(jù)顯著性分析。