干燥滅菌器用于剪接異構體克隆優化！??！

    PKR的dsRBD能夠與5′端三磷酸 的單鏈RNA結合并引起PKR的活化，但其研究并沒 有排除這種結合是否有鏈接區的參與 。MAYO 等最新研究認為，PKR與單鏈RNA的結合是由于 鏈接區有一段富含堿性氨基酸的 Basic Region 的作 用。富含堿性氨基酸的區域帶較多正電荷，能夠與 單鏈 RNA 帶負電荷的磷酸基團結合，并由此促進 KD的二聚化和活化。Taq DNA 聚合酶、Prime? star DNA 聚合酶、dNTP、限制性內切酶（Xho I 和 EcoR I）、DL2000 Marker 購于 TaKaRa 公司；瓊脂糖 （Agarose）、無水乙醇、異丙醇、DEPC（焦碳酸二乙 酯）均購于上海生工生物工程有限責任公司。RNA 提取試劑盒和反轉錄試劑盒均購于 TaKaRa 公司。 美國ABI公司PCR儀、美國Thermo公司微型高速離 心 機 、上 海 博 迅 立 式 壓 力 蒸 汽 滅 菌 器（XQ-LS100G）、蘇州凈化超凈工作臺（SW-CJ-ED）、杭州奧 盛三聯多用途金屬浴、上海天能EPS300電泳儀等。

    在斑馬魚基因組內，雖然同時存在等位基因 ZPKRa（基因登錄號：AM421526. 1）和 ZPKRb（基因 登錄號：AM421527. 1），但兩者的核苷酸序列相差很 小，氨基酸序列則只有5個氨基酸的差異，且都不在 關鍵的位點 。除此之外，本研究發現斑馬魚細胞 內 還 同 時 存 在 ZPKR 和 ZPKRV（基 因 登 錄 號 ： MH425504. 1）兩種不同結構的PKR的表達，ZPKRV 僅僅在鏈接區缺失28個氨基酸殘基，其中包含缺失 鏈接區內的功能模體堿性區。斑馬魚體內這2種PKR的轉 錄表達，其翻譯表達的產物將在刺激后24 h共存于細 胞內，通過顯性的負效應，可能減弱其PKR上調后對 蛋白翻譯的抑制作用。事實上，qPCR結果顯示， 在Poly I：C刺激后的24 h，ZPKRV表達達到峰值，并 且 ZPKR和 ZPKRV的比值最小，為 3. 08。這時兩者 的相互作用產生的顯性負效應最大，對蛋白翻譯抑制 作用最小。